中药川贝母定量分析方法研究.PDF
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2006年2月23日
第1页 |
参见附件(91KB,4页)。
中药川贝母定量分析方法研究
余 华1 , 2
, 姜 艳1
, 李 萍1 3
, 李绍平2
, 王一涛2
(1. 中国药科大学 现代中药重点实验室 ,江苏 南京 210038 ;
2. 澳门大学 中华医药研究所 ,澳门)
[摘要] 目的:研究常用中药川贝母的定量分析方法。方法:应用高效液相色谱法。以 4 种川贝母共有的有
效成分贝母辛为指标;采用Agilent Hypersil BDS 2C18 (410 mm× 250 mm ,5μm)色谱柱 ,以乙腈2水2二乙胺(37∶ 63∶ 0103)
为流动相 ,流速110 mL· min- 1;Alltech 2000蒸发光散射检测器检测 ,外标两点法定量。结果:贝母辛在 01031 88~
11020 mg· mL - 1
呈线性 ,回收率为10211 %( n = 5) ,RSD 3186 %。根据 33 批不同产地或来源的川贝母药材中贝母辛
的含量结果 ,确定贝母辛的含量限度为010070 %。结论:本法为良好的贝母辛的定量分析方法 ,可用于川贝母药材
的质量控制。
[关键词] 川贝母;贝母辛;HPLC 2ELSD;含量测定;质量控制
[中图分类号] R 28411 [文献标识码] A [文章编号] 100125302 (2005) 0820572204
[收稿日期] 2004203220
[基金项目] 国家自然科学基金(30070886) ;教育部跨世纪人
才基金( [2002 ]48号)
[通讯作者] 3
李萍,Tel : (025) 85391244 ,Fax : (025) 85322747 ,E 2
mail :lipingli @public1. ptt . js. cn
川贝母为常用止咳化痰药 , 《中国药典》 2000 年
版一部川贝母的基源植物包括川贝母 Fritillaria cir2
rhosa D1 Don1、暗紫贝母 F1 unibracteata Hsiao et K1
C1 Hsia、梭砂贝母 F1 delavayi Franch1 和甘肃贝母
F1 przewalskii Maxim1[1 ]。由于川贝母药材来源于多
基源植物 ,加之成分复杂 ,因而其质量控制一直是一
个难题 ,药典中仅有形态鉴别方法 ,有效成分或指标
成分的含量测定方法尚为空白。作者在多年研究贝
母化学成分和药理作用的基础上[2 ,3 ]
,建立川贝母
定量分析方法 ,为完善川贝母的质量标准提供科学
依据。
1 仪器与材料
Agilent 1100高效液相色谱仪 ,Agilent G1312A二
元泵 , Rheodyne7725i 手动进样阀 ( 20μ L) , Agilent
Chemstation6101色谱工作站 ,Agilent 359001 数模转
换器;Alltech 2000蒸发光散射检测器;WYK- 2 型无
音无油空压机(天津市蓝珂科技实业公司) 。乙腈为
色谱纯;纯净水(杭州娃哈哈集团) ;二乙胺、氯仿、氨
水为分析纯;甲醇为特级纯(江苏汉邦科技有限公
司) 。贝母辛、西贝素苷、西贝素、贝母甲素和贝母乙
素对照品由本实验室自制 ,结构经光谱鉴定 ,纯度经
高效液相色谱分析大于 98 %。川贝母药材样品共
33份(见表1) ,均经作者本人鉴定 ,并由中国药科大
学生药学教研室李萍教授复核 ,现存放于中国药科
大学生药学教研室及澳门大学中华医药研究所。
2 方法与结果
211 提取条件的优化
以甘肃漳县产甘肃贝母为样品 ,对样品提取方
法进行考察。
21111 提取溶剂的选择 采用氨水浸润 1 h 后 ,分
别以乙醚、甲醇、氯仿、氯仿2甲醇(4∶ 1) 4种溶剂冷浸
过夜 ,超声提取 1 h ,见表 1 ,结果表明 ,乙醚提取杂
质最少 ,但提取率低;氯仿2甲醇(4∶ 1)提取率最高 ,且杂质少。因此选用氯仿2甲醇(4∶ 1) 作为提取溶
剂。
表1 不同溶剂提取率的比较( n = 3) %
溶剂 贝母辛提取率
乙醚 01014± 01000 6
氯仿 01013± 01000 1
甲醇 01021± 01000 2
氯仿2甲醇(4∶ 1) 01027± 01000 1
21112 提取方式的选择 由于氯仿2甲醇(4∶ 1)混
合溶剂不适宜用索氏提取 ,因此比较了冷浸后超声、热回流2种方式。结果见表2 ,可见氯仿2甲醇(4∶ 1)
回流提取较完全。
21113 提取时间的选择 样品以氯仿2甲醇(4∶ 1)
· 275 ·
第30卷第8期
2005年4月 中 国 中 药 杂 志
China Journal of Chinese Materia Medica
Vol130 ,Issue 8
April ,2005
? 1995-2005 Tsinghua Tongfang Optical Disc Co., Ltd. All rights reserved. 表2 不同方法提取率的比较( n = 3) %
提取方法与时间 贝母辛提取率
超声 1 h 01027± 01000 1
回流 4 h 01043± 01000 1
注:超声前先用溶剂冷浸过夜
分别加热回流(80 ℃) 1 ,2 ,3 ,4 h ,结果见表 3。贝母
辛2 h即已提取完全 ,由此可确定贝母辛的最佳提
取条件为:氨水浸润 1 h 后 ,以混合溶剂氯仿2甲醇
(4∶ 1)加热回流(80 ℃)提取2 h。
表3 不同提取时间的提取率比较( n = 3)
提取时间 h 贝母辛提取率 %
1 01043± 01000 4
2 01045± 01001 1
3 01044± 01001 5
4 01043± 01000 1
212 色谱条件
Agilent Hypersil BDS 2C18色谱柱 (410 mm ×250
mm ,5μm) ;流动相A:梯度洗脱,0~15 min乙腈2水2二
乙胺(37∶ 63∶ 0103) ,15~20 min线性上升到乙腈2水2二
乙胺 (50∶ 50∶ 0103) , 20~50 min 乙腈2水2二乙胺
(50∶ 50∶ 0103) ,50~51 min线性上升到乙腈2水2二乙胺
(90∶ 10∶ 0103) ,51~55 min 乙腈2水2二乙胺(90∶ 10∶
0103) ;流动相B :乙腈2水2二乙胺(37∶ 63∶ 0103) ;流速
110 mL · min - 1; Alltech 2000 蒸发光散射检测器
(ELSD) ,漂移管温度115 ℃,载气流速310 L· min - 1。
213 样品制备
对照品溶液的制备:精密称取贝母辛、西贝素
苷、西贝素、贝母甲素和贝母乙素对照品各约 5 mg ,置5 mL 量瓶中 ,加甲醇溶解并稀释至刻度 ,摇匀 ,即
得混合对照品贮备液;精密称取贝母辛对照品约 5
mg ,置 5 mL 量瓶中 ,加甲醇溶解并稀释至刻度 ,摇
匀 ,即得贝母辛对照品贮备液。
供试品溶液的制备:取本品粉末(过 4 号筛) 2
g ,精密称定 ,置圆底烧瓶中 ,加氨水 4 mL 浸润 1 h ,加混合溶剂氯仿2甲醇(4∶ 1) 40 mL ,称重 ,混匀 ,置 80
℃水浴加热回流2 h ,放冷 ,称重 ,加混合溶剂补足重
量 ,滤过 ,精密量取续滤液 25 mL ,置蒸发皿中蒸干 ,残渣加甲醇溶解并转移至1 mL 量瓶中 ,加甲醇至刻
度 ,摇匀 ,即得 ......
余 华1 , 2
, 姜 艳1
, 李 萍1 3
, 李绍平2
, 王一涛2
(1. 中国药科大学 现代中药重点实验室 ,江苏 南京 210038 ;
2. 澳门大学 中华医药研究所 ,澳门)
[摘要] 目的:研究常用中药川贝母的定量分析方法。方法:应用高效液相色谱法。以 4 种川贝母共有的有
效成分贝母辛为指标;采用Agilent Hypersil BDS 2C18 (410 mm× 250 mm ,5μm)色谱柱 ,以乙腈2水2二乙胺(37∶ 63∶ 0103)
为流动相 ,流速110 mL· min- 1;Alltech 2000蒸发光散射检测器检测 ,外标两点法定量。结果:贝母辛在 01031 88~
11020 mg· mL - 1
呈线性 ,回收率为10211 %( n = 5) ,RSD 3186 %。根据 33 批不同产地或来源的川贝母药材中贝母辛
的含量结果 ,确定贝母辛的含量限度为010070 %。结论:本法为良好的贝母辛的定量分析方法 ,可用于川贝母药材
的质量控制。
[关键词] 川贝母;贝母辛;HPLC 2ELSD;含量测定;质量控制
[中图分类号] R 28411 [文献标识码] A [文章编号] 100125302 (2005) 0820572204
[收稿日期] 2004203220
[基金项目] 国家自然科学基金(30070886) ;教育部跨世纪人
才基金( [2002 ]48号)
[通讯作者] 3
李萍,Tel : (025) 85391244 ,Fax : (025) 85322747 ,E 2
mail :lipingli @public1. ptt . js. cn
川贝母为常用止咳化痰药 , 《中国药典》 2000 年
版一部川贝母的基源植物包括川贝母 Fritillaria cir2
rhosa D1 Don1、暗紫贝母 F1 unibracteata Hsiao et K1
C1 Hsia、梭砂贝母 F1 delavayi Franch1 和甘肃贝母
F1 przewalskii Maxim1[1 ]。由于川贝母药材来源于多
基源植物 ,加之成分复杂 ,因而其质量控制一直是一
个难题 ,药典中仅有形态鉴别方法 ,有效成分或指标
成分的含量测定方法尚为空白。作者在多年研究贝
母化学成分和药理作用的基础上[2 ,3 ]
,建立川贝母
定量分析方法 ,为完善川贝母的质量标准提供科学
依据。
1 仪器与材料
Agilent 1100高效液相色谱仪 ,Agilent G1312A二
元泵 , Rheodyne7725i 手动进样阀 ( 20μ L) , Agilent
Chemstation6101色谱工作站 ,Agilent 359001 数模转
换器;Alltech 2000蒸发光散射检测器;WYK- 2 型无
音无油空压机(天津市蓝珂科技实业公司) 。乙腈为
色谱纯;纯净水(杭州娃哈哈集团) ;二乙胺、氯仿、氨
水为分析纯;甲醇为特级纯(江苏汉邦科技有限公
司) 。贝母辛、西贝素苷、西贝素、贝母甲素和贝母乙
素对照品由本实验室自制 ,结构经光谱鉴定 ,纯度经
高效液相色谱分析大于 98 %。川贝母药材样品共
33份(见表1) ,均经作者本人鉴定 ,并由中国药科大
学生药学教研室李萍教授复核 ,现存放于中国药科
大学生药学教研室及澳门大学中华医药研究所。
2 方法与结果
211 提取条件的优化
以甘肃漳县产甘肃贝母为样品 ,对样品提取方
法进行考察。
21111 提取溶剂的选择 采用氨水浸润 1 h 后 ,分
别以乙醚、甲醇、氯仿、氯仿2甲醇(4∶ 1) 4种溶剂冷浸
过夜 ,超声提取 1 h ,见表 1 ,结果表明 ,乙醚提取杂
质最少 ,但提取率低;氯仿2甲醇(4∶ 1)提取率最高 ,且杂质少。因此选用氯仿2甲醇(4∶ 1) 作为提取溶
剂。
表1 不同溶剂提取率的比较( n = 3) %
溶剂 贝母辛提取率
乙醚 01014± 01000 6
氯仿 01013± 01000 1
甲醇 01021± 01000 2
氯仿2甲醇(4∶ 1) 01027± 01000 1
21112 提取方式的选择 由于氯仿2甲醇(4∶ 1)混
合溶剂不适宜用索氏提取 ,因此比较了冷浸后超声、热回流2种方式。结果见表2 ,可见氯仿2甲醇(4∶ 1)
回流提取较完全。
21113 提取时间的选择 样品以氯仿2甲醇(4∶ 1)
· 275 ·
第30卷第8期
2005年4月 中 国 中 药 杂 志
China Journal of Chinese Materia Medica
Vol130 ,Issue 8
April ,2005
? 1995-2005 Tsinghua Tongfang Optical Disc Co., Ltd. All rights reserved. 表2 不同方法提取率的比较( n = 3) %
提取方法与时间 贝母辛提取率
超声 1 h 01027± 01000 1
回流 4 h 01043± 01000 1
注:超声前先用溶剂冷浸过夜
分别加热回流(80 ℃) 1 ,2 ,3 ,4 h ,结果见表 3。贝母
辛2 h即已提取完全 ,由此可确定贝母辛的最佳提
取条件为:氨水浸润 1 h 后 ,以混合溶剂氯仿2甲醇
(4∶ 1)加热回流(80 ℃)提取2 h。
表3 不同提取时间的提取率比较( n = 3)
提取时间 h 贝母辛提取率 %
1 01043± 01000 4
2 01045± 01001 1
3 01044± 01001 5
4 01043± 01000 1
212 色谱条件
Agilent Hypersil BDS 2C18色谱柱 (410 mm ×250
mm ,5μm) ;流动相A:梯度洗脱,0~15 min乙腈2水2二
乙胺(37∶ 63∶ 0103) ,15~20 min线性上升到乙腈2水2二
乙胺 (50∶ 50∶ 0103) , 20~50 min 乙腈2水2二乙胺
(50∶ 50∶ 0103) ,50~51 min线性上升到乙腈2水2二乙胺
(90∶ 10∶ 0103) ,51~55 min 乙腈2水2二乙胺(90∶ 10∶
0103) ;流动相B :乙腈2水2二乙胺(37∶ 63∶ 0103) ;流速
110 mL · min - 1; Alltech 2000 蒸发光散射检测器
(ELSD) ,漂移管温度115 ℃,载气流速310 L· min - 1。
213 样品制备
对照品溶液的制备:精密称取贝母辛、西贝素
苷、西贝素、贝母甲素和贝母乙素对照品各约 5 mg ,置5 mL 量瓶中 ,加甲醇溶解并稀释至刻度 ,摇匀 ,即
得混合对照品贮备液;精密称取贝母辛对照品约 5
mg ,置 5 mL 量瓶中 ,加甲醇溶解并稀释至刻度 ,摇
匀 ,即得贝母辛对照品贮备液。
供试品溶液的制备:取本品粉末(过 4 号筛) 2
g ,精密称定 ,置圆底烧瓶中 ,加氨水 4 mL 浸润 1 h ,加混合溶剂氯仿2甲醇(4∶ 1) 40 mL ,称重 ,混匀 ,置 80
℃水浴加热回流2 h ,放冷 ,称重 ,加混合溶剂补足重
量 ,滤过 ,精密量取续滤液 25 mL ,置蒸发皿中蒸干 ,残渣加甲醇溶解并转移至1 mL 量瓶中 ,加甲醇至刻
度 ,摇匀 ,即得 ......
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